摘要：目的原核表达枯草芽孢杆菌Expansin蛋白,并分析其促进多糖糖化的活性。方法以过夜培养的Bacillus subtilis subsp. Subtilis subtilis str. 168基因组为模板合成expansin基因;在引物的N-端添加6-his tag,PCR合成融合基因6his-expansin,构建重组质粒6his-expansin-6his-p ET28a(+)[heh-pET28a(+)],转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白6His-Expansin-6His(HEH);并对表达条件进行优化。产物经Ni-NTA纯化,检测其与多糖降解酶(polysaccharide degrading enzyme,PDE)(纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶)及多糖复合酶(polysaccharide complex enzyme,PCE)制剂的协同活性(synergistic activity,SA)。结果经双酶切鉴定,重组质粒heh-p ET28a(+)构建正确;融合蛋白HEH在0. 05 mmol/L IPTG 30℃诱导30 h的最适表达条件下,表达量约为1. 2 mg/m L,其相对分子质量为26 400,目的蛋白纯度达95%;该蛋白与纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶的SA分别为171. 53%、61. 95%、230. 00%,与PCE降解滤纸(filter paper)、秸秆(rice straw)的SA分别为312. 83%、356. 59%。结论重组的融合蛋白HEH与PDE均具有较高的协同作用,为Expansin在生物质木质纤维素糖化领域的应用奠定了基础。
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