摘要：目的探讨分离耐钙犬左室三层细胞的方法,并利用全细胞膜片钳技术进行电生理记录。方法采用改良的Langendorff灌流装置,经主动脉左冠窦插管灌流带有左室前降支的犬心肌组织块,分离出单个耐钙心室肌细胞。先根据解剖部位将心室肌细胞分为内、中、外三层;再采用全细胞膜片钳技术,在电流钳模式下,各层随机选取8个细胞记录动作电位(AP)、快激活延迟整流钾电流(IKr)、慢激活延迟整流钾电流(IKs)、晚钠电流(INa-L),分析三层的心室肌细胞的电生理特性。结果分离状态良好的单个心室肌细胞率为90%以上,呈杆状,表面光滑,横纹清晰,边缘锐利,静止不动;内层(Endo)心室肌细胞没有尖峰-圆顶样形态,动作电位复极90%的时程(APD90)最短;中层(Mid)心室肌细胞也有尖峰-圆顶样形态,但不如外层(Epi)细胞明显,APD90最长;Epi心室肌细胞有明显的尖峰-圆顶样形态,APD90介于Mid与Endo之间。在-30 mV电压下,Mid细胞INa-L电流密度较Endo、Epi的电流密度稍大,但无统计学差异;三层细胞IKr的电流密度无明显差异;Mid细胞的IKs的电流密度在三层心肌细胞中最小,Endo、Epi中无明显差异。结论该方法更加易于操作,节约实验成本和时间,分离的细胞数量多、活性高;结合解剖部位和电生理特点,能有效鉴别各层心室肌细胞;成功分离出细胞,可用于离子通道特性的研究。
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