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摘要：目的探讨小干扰RNA（siRNA）沉默大鼠软骨细胞的CD44基因后对细胞CD44基因表达的抑制作用及对软骨细胞在羧甲基壳聚糖（CMCS）作用下细胞生物学特性变化及其作用机制。方法构建针对CD44基因特异性的siRNA（siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3），Lipofectamine“2000转染软骨细胞。通过免疫荧光鉴定cD44基因特异性siRNA（CD44-siRNA）的转染情况，通过反转录-聚合酶链反应（FIT—PCR）及蛋白印迹法检测CD44-siRNA转染细胞中CD44基因及蛋白的表达情况；通过硝普钠诱导软骨细胞凋亡并通过流式细胞技术检测CMCS对硝普钠诱导正常及经CD44-siRNA转染软骨细胞凋亡的影响。采用单因素方差分析及SNK—q检验对结果进行统计学分析。结果免疫荧光检测发现CD44-siRNA成功转染进入软骨细胞，转染率在60％左右。RT—PCR检测结果表明，转染siRNA-1后的24、48及72h，与空白对照组（0．429±0．053，0．501±0．037，0．341±0．009）相比，CD44的mRNA表达明显减弱（分别为0．198±0．007，0．211±0．016，0．153±0．005；q=5．93，7．01，11．23；P〈0．01）。蛋白印迹法检测表明转染siRNA-1后24h，与空白对照组相比，CD44的蛋白表达明显减弱（0．231±0．064与0．675±0．113，q=13．09，P〈0．01）。流式细胞检测结果表明3mmol／L硝普钠可以成功诱导软骨细胞发生早期凋亡[（70±6）％]；50、100、200μg／mlCMCS对硝普钠诱导的凋亡有-定的抑制作用[凋亡率分别为（51±7）％，（30±4）％，（15±4）％；q=5．08，6．97，9．73；P〈0．01]；但CMCS对硝普钠诱导的CD44-siRNA-1转染的软骨细胞的凋亡抑制作用比未转染组明显减弱[凋亡率分别为（34±6）％和（15±4）％，q=6．95，P〈0．01]。结论CD44特异性siRNA-1转染体外培养的大鼠软骨细胞能显著下调CD44基因的表达；CD44基因在CMCS?；は跗漳朴盏既砉窍赴蛲鲋蟹⒒又匾淖饔?。